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Viernes, 28/11/2014

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Hemos demostrado la optimización exitosa de una proteína candidata vacuna contra la malaria multi-subunidad recombinante para la producción en la levadura metilotrófica Pichia pastoris por la identificación y la posterior eliminación de dos sitios de escisión de la proteasa. Después de observar la degradación de proteínas en el sobrenadante de cultivo de una fermentación de alimentación discontinua, el fragmento proteolítico predominante de la proteína recombinante secretada se analizó por espectrometría de masas. Los datos de MS, indican la escisión de una secuencia de aminoácidos que coincide con el de levadura KEX2 proteasa motivo de consenso Ekre. La escisión en esta región fue completamente abolida por la deleción del motivo Ekre en una variante modificada. Esta variante modificada fue producido, purificado, y utilizado para la inmunización de conejos, la inducción de títulos de anticuerpos específicos de antígeno alta (2x106). IgG total de conejo suero inmune reconoce las diferentes etapas de los parásitos P. falciparum en los ensayos de inmunofluorescencia, indicando plegamiento nativo de la vacuna candidata. Sin embargo, la variante modificada se degrada todavía, aunque en diferentes fragmentos. Más análisis por espectrometría de masas y secuenciación N-terminal reveló un segundo sitio de escisión de aguas abajo de la PEVK motivo. Por lo tanto, quitamos un tramo de 17-amino-ácido, incluyendo el motivo PEVK, resultando en la posterior producción de la proteína candidata a vacuna recombinante de longitud completa y sin degradación significativa, con un rendimiento de 53 mg por L de volumen de cultivo. Se demuestra claramente que la degradación proteolítica de proteínas recombinantes por las proteasas endógenas de P. pastoris se puede prevenir mediante la identificación y eliminación de tales sitios de escisión. Esta estrategia es particularmente relevante para la producción de vacunas de subunidad recombinante, donde el rendimiento y la estabilidad del producto desempeñan un papel más importante que para la producción de una secuencia nativa definido rigurosamente-que es necesario para la mayoría de las moléculas terapéuticas.

El artículo se encuentra disponible en inglés en: Spiegel H, Schinkel H, Kastilan R, Dahm P, Boes A, Scheuermayer M, Chudobová I, Maskus D, Fendel R, Schillberg S, Reimann A, Fischer R. (2014). Optimization of a multi-stage, multi-subunit malaria vaccine candidate for the production in Pichia pastoris by the identification and removal of protease cleavage sites.Biotechnol Bioeng. doi: 10.1002/bit.25481.PMID:25335451

Fuente: Pubmed


Focalización en la β-amiloide (Aß) es una estrategia prometedora inmunoterapéutico para la enfermedad de Alzheimer (AD). Sin embargo, Aß (1-15) por sí sola secuencia induce respuesta de anticuerpos bajos y escasa protección contra la AD. Se describe aquí la caracterización inmunológica y eficacia protectora de varias vacunas quiméricas recombinantes con hexavalente Aß plegable (1-15) (6Aβ15) fusionado al PADRE o proteínas transportadoras de toxinas derivadas. La inmunización con estos antígenos quiméricos generó respuestas inmunitarias robustas Th2 con los títulos de anticuerpos anti-Aß42 altas en diferentes ratones, que reconocen oligómeros Aß42 neurotóxicos, pero no estimuló respuestas de las células T-Aß42 específica. Estos 6Aβ15 vacunas quiméricas redujo notablemente Aß patología y prevenir el desarrollo de anomalías de comportamiento en los ratones inmunizados con EA mayores. Es importante destacar que las proteínas portadoras de toxina derivada como adyuvantes moleculares de vacunas quiméricos podrían aumentar sustancialmente la respuesta inmune y superar Aβ- y viejos hiporreactividad asociada a la edad, y provocar la respuesta de anticuerpos-Aß específica a largo plazo, que a su vez inhibe la patología Aß mediada y la mejora de adquisición y retención de memoria espacial en ratones inmunizados AD. Estos datos indican que los fragmentos de toxinas como adyuvantes moleculares prometen nuevas herramientas para el diseño racional y desarrollo de prototipos de vacunas quiméricas para la EA y este tipo de diseño de la vacuna quimérica tiene la ventaja añadida de la superación de hipo-respuesta en los pacientes con EA de edad avanzada con pre-existente de memoria células Th de la toxina del tétanos.

El artículo se encuentra disponible en inglés en: Yun-Zhou Yu, Wen-Bin Wang, Ao Chen, Qing Chang, Si Liu, Meng Zhao, Shuang Wang, Wei-Yi Qiu, Xiao-Bin Pang, Qing Xu, Zhi-Wei Sun.(2014). Strikingly reduced amyloid burden and improved behavioral performance in Alzheimer's disease mice immunized with recombinant chimeric vaccines by hexavalent foldable Aβ₁₋₁₅ fused to toxin-derived carrier proteins.Journal of Alzheimer's Disease, 41(1):243-60. doi: 10.3233/JAD-132177.PMID:24625800

Fuente: Pubmed

ScienceDirect
El virus del dengue (DENV) es una causa importante de morbilidad y mortalidad en las regiones tropicales y subtropicales, causando cientos de millones de infecciones cada año. Infecciones van desde asintomática hasta una enfermedad febril autolimitada, la fiebre del dengue (FD), para el dengue hemorrágico o síndrome de choque fiebre / dengue que amenaza la vida (DH / SCD). La expansión del hábitat de los mosquitos transmisores de DENV se ha traducido en un aumento espectacular en el número de casos en los últimos 50 años, y los brotes recientes se han producido en los Estados Unidos. El desarrollo de una vacuna contra el dengue es una prioridad de salud global. El desarrollo de vacunas DENV es un reto debido a la existencia de cuatro serotipos del virus (DENV1-4), que una vacuna debe proteger. Además, la respuesta inmune adaptativa a DENV pueden ser tanto de protección y patógena tras la infección posterior, y las características precisas de protección frente a la respuesta inmune a patógenos DENV son desconocidos, lo que complica el desarrollo de vacunas. Numerosas vacunas candidatas, incluyendo virus vivos atenuados, inactivados subunidad recombinante, ADN y vacunas que contienen vectores virales, se encuentran en distintas fases de desarrollo clínico, desde preclínica a la fase 3 Esta revisión se discutirá la respuesta inmune adaptativa a DENV, retos de la vacuna del dengue, animal modelos utilizados para probar vacunas candidatas de dengue, y los enfoques históricos y actuales de la vacuna del dengue.

El artículo se encuentra disponible en inglés en: Yauch, Lauren E.,Shresta, Sujan.(2014).Desarrollo de la vacuna del virus del dengue. Advances in Virus Research, Volume 88, 2014, Pages 315-372. DOI: 10.1016/B978-0-12-800098-4.00007-6

Fuente: ScienceDirect

Scielo
La relación de la tuberculosis, el Bacillus Calmette-Guérin y las vacunas de tuberculosis como dominio bajo estudio, parte del hecho de que la única vacuna disponible hoy para prevenir la tuberculosis en humanos es la BCG, y el mejoramiento de ella o el desarrollo de nuevas vacunas es estratégico para el control de esta enfermedad. Este estudio pretende contribuir con estas importantes investigaciones a partir de los estudios patentométricos, y tiene como objetivo realizar un análisis métrico que permita describir la productividad de patentes sobre tuberculosis, Bacillus Calmette-Guérin y vacunas de tuberculosis en un determinado periodo de tiempo. Para el estudio de la productividad se analizó el comportamiento de indicadores temporales y geográficos en el dominio, en el que se utilizaron técnicas y herramientas apropiadas para los documentos de patentes. A la investigación de la tuberculosis como enfermedad infecciosa transmisible se le han dedicado grandes esfuerzos. La tuberculosis fue considerada hasta hace poco un problema de salud de los países en desarrollo, mientras hoy, con la reemergencia de la enfermedad, los países desarrollados han acaparado su investigación; sin embargo, estos esfuerzos no han sido proporcionales con la investigación dedicada a una nueva generación de vacunas contra esta enfermedad y no existen nuevas patentes que lo demuestren.

El artículo se encuentra disponible a texto completo en: Díaz Pérez Maidelyn, Guzmán Sánchez María Victoria, Giráldez Reyes Raudel, Armas Peña Dayron, Rodríguez Font Reinaldo Javier, Carrillo Calvet Humberto Andrés. Tuberculosis, Bacillus Calmette-Guérin (BCG) y vacunas de tuberculosis: análisis de patentes. Rev. cuba. inf. cienc. salud  [revista en la Internet]. 2014  Sep;  25(3): 259-269.

Fuente: Scielo

Scielo
La vacuna Heberpenta-L, está indicada para la inmunización activa contra la difteria, tétanos, tos ferina (pertussis), hepatitis B y Haemophilus influenzae tipo b. En el Centro Nacional de Biopreparados se diseñó una nueva planta de producción de productos parenterales, resultando la vacuna pentavalente uno de los productos recién introducidos. Con tal propósito se diseñó una nueva metodología para la formulación de la vacuna, adecuando los procedimientos normalizativos de operación vigentes a esta nueva instalación. La validación con medio de cultivo caldo triptona soya, resultó una de las etapas más importantes para garantizar, tanto las operaciones de esterilización y enfriamiento de las soluciones, como todos los pasos críticos en la formulación y operaciones asépticas para futuros productos. Se estableció una nueva metodología en el proceso de formulación para la preparación de las soluciones, la cual tuvo lugar en un área independiente al área de la formulación final del producto. Los resultados satisfactorios obtenidos en la formulación de tres lotes de consistencia de la vacuna Heberpenta-L, no solo garantizaron el cumplimiento de los requisitos de calidad establecidos para esta vacuna, sino que además constituyeron la base preliminar a largas campañas de otros productos.

El artículo se encuentra disponible a texto completo en: Díaz Imeray, Villegas Maikel, Hidalgo Luis Carlos. Nueva metodología para la formulación de la vacuna Heberpenta-L. Rev. colomb. biotecnol  [serial on the Internet]. 2014  July;  16( 1 ): 99-103.

Fuente: Scielo

ScienceDirect
La hepatitis C es una enfermedad viral hepática causada por un hepacivirus de la familia Flaviviridae, el cual posee un genoma de molécula única de ARN altamente variable. Codifica 10proteínas necesarias para infectar las células y multiplicarse dentro de ellas. Su replicación se da únicamente en los hepatocitos. Debido a su gran variabilidad genómica y a la ausencia de síntomas de la enfermedad, se dificulta realizar un tratamiento temprano y acertado. En este trabajo se analiza el mecanismo molecular mediante el cual el virus infecta los hepatocitos y desarrolla la enfermedad. Particularmente, analizamos las alternativas terapéuticas, discutiendo la posibilidad de mejorar el tratamiento con el uso de nuevas vacunas específicas. Destacamos el uso de nuevas terapias basadas en ácidos nucleicos, principalmente vectores de ADN. Durante los próximos años, una vez que este tipo de tratamiento sea evaluado adecuadamente en ensayos clínicos y se equilibren los costos, constituirá una alternativa a los métodos convencionales muy beneficiosa.

El artículo está disponible en: Llanes, M. S., Palacios, N. S., Piccione, M., Ruiz, M. G., & Layana, C. (2014). Aspectos moleculares de la respuesta antiviral contra el virus de la hepatitis C importantes para el desarrollo de vacunas. Enfermedades Infecciosas y Microbiología Clínica

Fuente: ScienceDirect


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